Plásmido CRISPR de Activación (h) Histamine H4 Receptor: sc-402430-ACT

HRH4 codifica el receptor H4 de histamina, un receptor acoplado a proteínas G que se expresa predominantemente en células inmunitarias y hematopoyéticas, donde detecta la histamina y modula la señalización inflamatoria. La activación de HRH4 se acopla principalmente a vías Gi/o para reducir el AMPc y modular respuestas posteriores dependientes de MAPK, PI3K/AKT y calcio, que influyen en la quimiotaxis, la producción de citocinas y el tráfico de leucocitos. A través de estos procesos, HRH4 contribuye a la regulación de la inflamación alérgica y de una homeostasis inmunitaria más amplia en tejidos como la piel, el pulmón y el tracto gastrointestinal. La alteración de la expresión o la señalización de HRH4 se ha investigado en afecciones inflamatorias crónicas y fenotipos de enfermedad asociados al sistema inmunitario, lo que respalda su utilidad como nodo mecanístico en la investigación en inmunología.

Histamine H4 Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HRH4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Histamine H4 Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HRH4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HRH4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Histamine H4 Receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HRH4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Histamine H4 Receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Histamine H4 Receptor en células tumorales con expresión de HRH4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.