HiNF-P Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-416760-ACT-2

O gene humano HINFP codifica o fator de transcrição HiNF-P, um regulador específico de sequência que coordena a entrada na fase S ao ativar a expressão dos genes de histona H4 e promover a montagem da cromatina durante a replicação do DNA. O HiNF-P atua no controle do ciclo celular por meio de interações com redes regulatórias ligadas a E2F/RB e contribui para a estabilidade do genoma ao assegurar a deposição oportuna de nucleossomos e a manutenção da cromatina acoplada à replicação. A desregulação de programas transcricionais associados ao HINFP tem sido relacionada à proliferação aberrante e a estados epigenéticos alterados observados no câncer e em outros distúrbios que envolvem desequilíbrio do ciclo celular. A edição gênica de HINFP em modelos de células humanas possibilita estudos mecanísticos da regulação de genes de histonas, das respostas ao estresse replicativo e da dinâmica da cromatina, apoiando o mapeamento de vias e análises de genômica funcional.

HiNF-P O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HINFP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HiNF-P O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HINFP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HINFP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HiNF-P. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HINFP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HiNF-P no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HiNF-P em células tumorais com expressão de HINFP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.