HIF PHD3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-403671-LAC

EGLN3 codifica a proteína 3 contendo domínio de hidroxilase de prolina (HIF PHD3), uma dioxigenase sensora de oxigênio que hidroxila as subunidades HIF-α para promover a ubiquitinação dependente de VHL e a degradação proteassomal em condições normóxicas. Ao ajustar a estabilidade do HIF, a PHD3 regula programas transcricionais responsivos à hipóxia que controlam a angiogênese, o metabolismo glicolítico, a eritropoiese e a sobrevivência celular, e está ligada ao controle por retroalimentação na via celular de resposta à hipóxia. A atividade de EGLN3 é influenciada pela tensão de oxigênio, pelo ferro e pela disponibilidade de 2-oxoglutarato, integrando o estado metabólico à adaptação transcricional. A desregulação da sinalização EGLN3/HIF tem sido associada a contextos como hipóxia tumoral, biologia de isquemia-reperfusão e microambientes inflamatórios, dando suporte a estudos mecanísticos de sinalização dependente de oxigênio.

As Partículas de Ativação Lentivirais HIF PHD3 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de EGLN3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais HIF PHD3 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição EGLN3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de HIF PHD3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo EGLN3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.