HES6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404146-ACT

HES6（hairy and enhancer of split 6）は、Notch経路の出力を調節し、発生過程における系譜決定に影響を与える塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型の転写制御因子をコードします。ヒト細胞では、HES6はHES1による抑制作用に拮抗し得るほか、神経系および筋原性の転写プログラムと連携して、分化状態や増殖状態の形成に関与します。HES6の発現異常は複数の腫瘍で報告されており、転写制御の再配線、細胞可塑性、文脈依存的な細胞運命制御を研究するための機構的な手がかりとして利用されています。これらの特性により、HES6はNotchおよびbHLHシグナル下流の遺伝子制御ネットワークを解析する上で有用なノードとなります。

HES6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HES6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HES6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HES6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHES6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HES6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHES6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHES6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHES6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHES6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。