HES1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400387-ACT

HES1 (hairy and enhancer of split 1) codifica um represssor transcricional do tipo hélice-alça-hélice básica (bHLH) que atua como um efetor central da sinalização Notch para manter estados progenitores e suprimir programas de diferenciação específicos de linhagem. Ao recrutar complexos correpressores e modular oscilações transcricionais, HES1 influencia a progressão do ciclo celular, decisões de destino neural e hematopoético e a manutenção de células-tronco, além de integrar sinais de vias como Wnt e Hedgehog. A atividade desregulada de HES1 tem sido implicada em programas de desenvolvimento aberrantes e em redes transcricionais oncogênicas, inclusive em contextos nos quais alterações na via Notch contribuem para proliferação descontrolada. Como regulador nodal da diferenciação e da plasticidade, HES1 é frequentemente estudado em modelos de biologia tumoral, neurodesenvolvimento e processos regenerativos.

HES1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HES1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HES1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HES1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HES1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HES1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HES1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HES1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HES1 em células tumorais com expressão de HES1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.