hemicentin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405850

Visão geral

HMCN1 codifica a hemicentina-1, uma grande glicoproteína da matriz extracelular que ajuda a organizar a arquitetura da membrana basal e sustenta a adesão célula–matriz em tecidos sujeitos a stress mecânico. A hemicentina-1 participa na montagem e na remodelação da matriz extracelular, influenciando processos como a integridade epitelial, a morfogénese dos tecidos e a dinâmica da matriz associada à cicatrização. A perturbação ou desregulação de HMCN1 tem sido associada a fenótipos do tecido conjuntivo e oculares, e estudos genéticos relacionaram variantes a um maior risco de degenerescência macular relacionada com a idade, destacando a relevância para a biologia da matriz extracelular da retina. Como componente da MEC, a hemicentina-1 oferece um ponto de partida útil para estudar como a organização da matriz modula a migração celular, a mecanotransdução e a função de barreira.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO hemicentin-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene HMCN1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do HMCN1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do HMCN1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína hemicentin-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de HMCN1 para a investigação da sinalização de hemicentin-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) HMCN1 críticos para a função hemicentin-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos HMCN1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo hemicentin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo hemicentin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus HMCN1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo hemicentin-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR hemicentin-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia HMCN1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo HMCN1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.