HEL308 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-404447-LAC

O HELQ humano codifica a helicase de DNA HEL308, uma helicase 3′→5′ dependente de ATP que promove a estabilidade do genoma ao processar forquilhas de replicação estagnadas e intermediários de recombinação. A HEL308/HELQ atua na tolerância a danos no DNA, nas respostas ao estresse de replicação e no reparo de ligações cruzadas intercadeias, interagindo com a recombinação homóloga e com a sinalização do checkpoint da fase S para limitar aberrações cromossômicas. A interrupção ou desregulação de vias associadas ao HELQ tem sido vinculada à recuperação prejudicada das forquilhas de replicação e ao aumento da carga mutacional, tornando-o relevante para estudos de suscetibilidade ao câncer e de fenótipos de deficiência em reparo de DNA. Como uma helicase acoplada à replicação, a HEL308 é frequentemente investigada em contextos em que a proteção da forquilha, o bypass de lesões e o controle da recombinação determinam o destino celular sob estresse genotóxico.

As Partículas de Ativação Lentivirais HEL308 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de HELQ numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais HEL308 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição HELQ, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de HEL308. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo HELQ e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.