HCR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407960

Descripción general

CCHCR1 codifica la proteína humana de varilla α-helicoidal tipo *coiled-coil* (HCR), una proteína citoplasmática y perinuclear implicada en la regulación de la diferenciación de los queratinocitos, la homeostasis de la barrera epidérmica y la organización del citoesqueleto. HCR se ha relacionado con procesos que influyen en el tráfico vesicular y la proliferación celular, en consonancia con su enriquecimiento en la biología de la piel y del folículo piloso. La variación genética y la expresión alterada de CCHCR1 se asocian con la susceptibilidad a la psoriasis y a fenotipos cutáneos inflamatorios relacionados, lo que respalda su relevancia en vías que conectan las respuestas epiteliales al estrés con la señalización inmunitaria. Como resultado, CCHCR1 se estudia con frecuencia en modelos de biología de queratinocitos, de interacción entre rutas de señalización inflamatoria y de genética de enfermedades de la piel.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HCR (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CCHCR1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CCHCR1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CCHCR1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HCR.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CCHCR1 para la investigación de la señalización de HCR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CCHCR1 críticos para la función de HCR
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CCHCR1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HCR CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HCR CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CCHCR1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HCR (h) y el plásmido HDR HCR (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CCHCR1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CCHCR1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.