HCN2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405074

Visão geral

HCN2 codifica o canal 2 ativado por hiperpolarização e regulado por nucleotídeos cíclicos (hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 2), uma subunidade formadora de poro das correntes marcapasso Ih/If que acopla a hiperpolarização da membrana ao fluxo de entrada de cátions. Ao integrar a dependência de voltagem com a sinalização por nucleotídeos cíclicos, o HCN2 molda a excitabilidade rítmica, regula o potencial de membrana em repouso e influencia os padrões de disparo de potenciais de ação em neurônios e no tecido de condução cardíaca. A atividade do HCN2 interage com vias de GPCR–cAMP e com redes mais amplas de canais iônicos que controlam a integração sináptica e a regulação autonômica. Função ou expressão desregulada de HCN2 tem sido associada na literatura a alterações da excitabilidade neuronal e a fenótipos de condução relevantes para distúrbios como epilepsia, dor neuropática e suscetibilidade a arritmias cardíacas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HCN2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene HCN2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do HCN2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do HCN2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HCN2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de HCN2 para a investigação da sinalização de HCN2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) HCN2 críticos para a função HCN2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos HCN2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo HCN2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo HCN2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus HCN2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo HCN2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR HCN2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia HCN2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo HCN2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.