HCN1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404539-ACT

HCN1 kodiert den hyperpolarisationsaktivierten, durch zyklische Nukleotide gesteuerten Kanal 1 (HCN1), einen spannungsabhängigen Kationenkanal, der den Ih-Strom vermittelt und zur Einstellung des Ruhemembranpotenzials, zur dendritischen Integration sowie zu rhythmischen Entladungsmustern in erregbaren Zellen beiträgt. Die Kanalaktivität wird durch Membranhyperpolarisation und intrazelluläre zyklische Nukleotide moduliert und verknüpft damit elektrische Signalübertragung mit Second-Messenger-Signalwegen, etwa der cAMP-abhängigen Regulation der Erregbarkeit. Im Nervensystem trägt HCN1 zur synaptischen Responsivität und zu Netzwerkoszillationen bei, die sensorische Verarbeitung und Kognition prägen. Eine fehlregulierte HCN1-Expression oder -Funktion wird mit veränderter neuronaler Erregbarkeit und anfallsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Studien zu Kanalopathien und zur Neurophysiologie unterstreicht.

HCN1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HCN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HCN1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HCN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HCN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HCN1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HCN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HCN1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HCN1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HCN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.