Haspin Double Nickase Plasmid (m): sc-420703-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Haspin Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Haspin Double-Nickase-Plasmid (m) und Haspin Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Gsg2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Haspin Double Nickase Plasmid (m) | sc-420703-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Haspin Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420703-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Gsg2** kodiert **Haspin**, eine atypische Serin/Threonin-Kinase, die die mitotische Chromosomendynamik koordiniert, indem sie **Histon H3 an Threonin 3** phosphoryliert. Diese Modifikation fördert die Rekrutierung des **Chromosomal Passenger Complex (CPC)** und unterstützt eine korrekte Kohäsion und Segregation der Schwesterchromatiden. Über diese H3T3-Phosphorylierungsachse ist Haspin in zentromerische Signalnetzwerke eingebunden, an denen **Aurora‑B‑Aktivität**, die Kontrolle des **Spindel-Checkpoints** und die Stabilität der **Kinetochor–Mikrotubuli‑Anheftung** beteiligt sind. Störungen der Haspin-abhängigen mitotischen Regulation können chromosomale Instabilität und Aneuploidie begünstigen und verknüpfen die Funktion von Gsg2/Haspin mit Signalwegen, die allgemein für die Genomstabilität und proliferativen Stress relevant sind. Daher wird Gsg2 häufig in Studien zur Zellzyklusregulation, zum Crosstalk von Chromatinphosphorylierungen und in mechanistischen Modellen der mitotischen Genauigkeit in Säugerzellen untersucht.
Haspin Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Gsg2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Gsg2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Gsg2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Gsg2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.