HAPLN1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403874-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HAPLN1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HAPLN1 Double-Nickase-Plasmid (h) und HAPLN1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HAPLN1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HAPLN1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403874-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HAPLN1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403874-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HAPLN1 (Hyaluronan- und Proteoglykan-Link-Protein 1) kodiert ein Glykoprotein der extrazellulären Matrix, das Aggregate aus Hyaluronan und Chondroitinsulfat-Proteoglykanen stabilisiert und damit den Aufbau der Matrix, ihre Hydratation sowie die Gewebebiomechanik unterstützt. HAPLN1 trägt zu Zell–Matrix-Interaktionen und zu Programmen der ECM-Organisation bei, die Adhäsion, Migration und Mechanotransduktion beeinflussen, insbesondere in Bindegeweben und knorpelähnlichen Mikroumgebungen. Eine veränderte HAPLN1-Expression und Matrix-Verknüpfungsaktivität wurden mit fehlregulierter stromaler Umgestaltung, fibroseassoziierten Signalwegen und der Zusammensetzung des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht, was HAPLN1 zu einem hilfreichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Dynamik der extrazellulären Matrix in menschlichen Krankheitsmodellen macht. Als sekretierter bzw. ECM-assoziierter Faktor wird HAPLN1 häufig in der Systembiologie des Matrixumsatzes, des entzündlichen Remodellings und der Bildung metastasebezogener Nischen untersucht.
HAPLN1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HAPLN1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HAPLN1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HAPLN1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HAPLN1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.