非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
错构蛋白抗体（C-8）：sc-377386。Western blot 分析未处理的 K-562（A）、经化学处理的 K-562（B）、未处理的 HCT-116（C）和经化学处理的 HCT-116（D）完整细胞裂解物中的错构蛋白表达。使用的检测试剂：m-IgG2b BP-HRP：sc-542741。β-肌动蛋白（C4）：sc-47778，用作加载对照。使用的检测试剂：m-IgG Fc BP-HRP：sc-525409。
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
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hamartin CRISPR/Cas9 KO质粒 (h): sc-402444
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- hamartin CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（h） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在hamartin基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：hamartin: sc-377386，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
hamartin CRISPR/Cas9 KO质粒 (h) | sc-402444 | 20 µg | $397.00 |
概述
TSC1 编码 hamartin（错构瘤蛋白），这是一种支架蛋白，可与 TSC2（tuberin，结节硬化蛋白）形成具有功能的复合体，通过调控小 GTP 酶 Rheb 来抑制 mTORC1 信号通路。借助这一肿瘤抑制轴，hamartin 整合来自 PI3K–AKT、AMPK 以及细胞应激等信号输入，从而协调蛋白质合成、自噬、代谢与细胞生长。TSC1 的缺失或功能障碍会破坏 mTOR 依赖的稳态，改变溶酶体与细胞骨架动力学，并扰乱神经元和胶质细胞的发育。这些通路是结节性硬化症复合体（TSC）生物学研究以及更广泛的 mTOR 驱动的细胞生长与分化表型机制中的核心内容。
hamartin CRISPR/Cas9 KO质粒（h）是一组旨在针对性地破坏human细胞系中TSC1基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对TSC1基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏TSC1开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使hamartin蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建TSC1缺失的细胞模型，用于hamartin信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 hamartin 功能至关重要的 TSC1 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 TSC1 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 hamartin CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h) 和 hamartin CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别靶向 TSC1 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 hamartin HDR 质粒（h）编码的 HDR 供体构建体以及 hamartin HDR质粒（h2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由TSC1同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定TSC1靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。