HAI-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-407762-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HAI-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HAI-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und HAI-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SPINT2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HAI-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407762-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HAI-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407762-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SPINT2 kodiert den Hepatozyten-Wachstumsfaktor-Aktivator-Inhibitor 2 (HAI-2), einen Serinproteaseinhibitor vom Kunitz-Typ, der die perizelluläre Proteolyse begrenzt, indem er membranverankerte Proteasen wie Matriptase (ST14) und verwandte Aktivatoren reguliert. Durch die Einschränkung der proteaseabhängigen Aktivierung von Substraten, darunter Pro-HGF, sowie der nachgeschalteten MET-Signalübertragung trägt HAI-2 zur Aufrechterhaltung der Integrität epithelialer Barrieren, der Zellpolarität und eines kontrollierten Umbaus der extrazellulären Matrix bei. Die Funktion von SPINT2 ist eng mit Signalwegen verknüpft, die die epitheliale Homöostase, proteaseaktivierte Signalgebung und Entzündungsreaktionen steuern; eine Fehlregulation wurde mit aberrantem Gewebeumbau und krebsrelevanten Invasionsphänotypen in Verbindung gebracht. Eine veränderte SPINT2-Expression oder genetische Störung ist zudem an angeborenen epithelialen Erkrankungen beteiligt und trägt zu mechanistischen Studien des Protease‑Inhibitor‑Gleichgewichts in menschlichen Zellen bei.
HAI-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SPINT2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SPINT2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SPINT2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SPINT2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.