G_{α i-2} Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400568

Panoramica

GNAI2 codifica la subunità alfa della proteina G inibitoria umana Gα i-2, un trasduttore centrale della segnalazione mediata da GPCR che sopprime l’attività dell’adenilil ciclasi riducendo il cAMP intracellulare e modula le risposte a valle collegate a PKA e MAPK. Attraverso l’accoppiamento con diversi recettori, Gα i-2 influenza la segnalazione del calcio, la regolazione dei canali ionici, la chemiotassi e il rimodellamento del citoscheletro, plasmando la migrazione cellulare e i programmi di attivazione delle cellule immunitarie. Un’alterazione della segnalazione di GNAI2 è stata associata a vie infiammatorie deregolate e a segnali proliferativi aberranti osservati in molteplici contesti patologici, inclusi tumori e disturbi immuno-correlati. Queste proprietà rendono GNAI2 un nodo utile per analizzare l’architettura delle vie GPCR, la dinamica dei secondi messaggeri e la plasticità di segnalazione dipendente dal contesto nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Gα i-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GNAI2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GNAI2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GNAI2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Gα i-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GNAI2 per lo studio della segnalazione di Gα i-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GNAI2 critici per la funzione di Gα i-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GNAI2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Gα i-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Gα i-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GNAI2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Gα i-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Gα i-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GNAI2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GNAI2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.