GSTO1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404107-ACT

O GSTO1 humano codifica a glutationa S-transferase ômega-1, uma enzima atípica da família GST que catalisa reações de tioltransferase e de desglutationilação, importantes para manter o equilíbrio redox celular. Ao regular o estado de S-glutationilação dos tióis proteicos, o GSTO1 contribui para a defesa antioxidante, a proteostase e a sinalização responsiva ao estresse, em interface com o metabolismo da glutationa e vias de desintoxicação. Alterações na atividade do GSTO1 e variações genéticas têm sido associadas à suscetibilidade e à progressão de doenças ligadas ao estresse oxidativo e à inflamação, incluindo fenótipos neurodegenerativos e cardiometabólicos, bem como aspectos da biologia tumoral. Essas propriedades fazem do GSTO1 um ponto útil para investigar a sinalização regulada por redox, respostas ao estresse mitocondrial e do retículo endoplasmático (RE), e o impacto da química dependente de glutationa nas decisões de destino celular.

GSTO1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GSTO1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GSTO1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GSTO1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GSTO1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GSTO1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GSTO1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GSTO1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GSTO1 em células tumorais com expressão de GSTO1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.