GSTM5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406828

Panoramica

GSTM5 codifica la glutatione S-transferasi mu 5 (GSTM5), un enzima di detossificazione di fase II che catalizza la coniugazione del glutatione ridotto con composti elettrofili, supportando la difesa cellulare contro xenobiotici e specie reattive dell’ossigeno. Come parte della rete redox dipendente dal glutatione, GSTM5 contribuisce a mantenere la proteostasi e a limitare il danno ossidativo a lipidi, proteine e DNA. Variazioni o deregolazione dell’attività della famiglia GSTM sono state associate a una diversa suscettibilità allo stress ossidativo e alla segnalazione infiammatoria, processi spesso implicati nella carcinogenesi e nel danno tissutale. Nelle cellule umane, GSTM5 viene spesso studiato nel contesto del metabolismo di sostanze chimiche, delle risposte all’esposizione ambientale e dei meccanismi che modulano l’omeostasi redox cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GSTM5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GSTM5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GSTM5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GSTM5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GSTM5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GSTM5 per lo studio della segnalazione di GSTM5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GSTM5 critici per la funzione di GSTM5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GSTM5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GSTM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GSTM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GSTM5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GSTM5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GSTM5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GSTM5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GSTM5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.