GS27 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406352-ACT

Il gene umano **GOSR2** codifica **GS27**, una Qb-SNARE localizzata nel **cis-Golgi** e nel **compartimento intermedio RE–Golgi**, che supporta l’ancoraggio delle vescicole e la fusione di membrana nelle fasi iniziali della via secretoria. Interagendo con altre SNARE come **syntaxin 5**, **BET1** e membri della famiglia **SEC22**, GS27 contribuisce a mantenere l’organizzazione del Golgi, il traffico del carico e la processazione proteica attraverso cicli di trasporto dipendenti da **COPI/COPII**. L’alterazione della funzione di GOSR2 è stata associata a fenotipi di neurosviluppo e all’**epilessia mioclonica progressiva**, in linea con la sensibilità dei neuroni allo stress della via secretoria e allo squilibrio della proteostasi. Di conseguenza, GS27 è spesso studiata in contesti quali le risposte allo **stress del reticolo endoplasmatico**, la maturazione delle **glicoproteine** e il traffico retrogrado **Golgi–RE**.

GS27 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GOSR2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GS27 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GOSR2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GOSR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GS27. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GOSR2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GS27 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GS27 nelle cellule tumorali con espressione di GOSR2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.