Plásmido Doble Nickase (h) GS1: sc-405996-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GS1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GS1 (h) y el plásmido de doble nickasa GS1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PUDP. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GS1 Anticuerpo (B-4): sc-166043
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GS1 | sc-405996-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GS1 | sc-405996-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **PUDP** codifica la **pseudouridina-5′-fosfatasa (GS1)**, una enzima de la red de rescate de nucleósidos pirimidínicos que desfosforila el monofosfato de pseudouridina para generar pseudouridina, contribuyendo a la homeostasis de nucleótidos y al recambio de ARN. Esta actividad conecta el catabolismo de las modificaciones del ARN con el metabolismo central del carbono al canalizar ribosa-1-fosfato e intermediarios relacionados hacia vías metabólicas más amplias. Una función alterada de PUDP/GS1 puede perturbar el equilibrio celular de nucleótidos y el estado metabólico, procesos que con frecuencia están acoplados al estrés proliferativo y a programas de mantenimiento del genoma. Por ello, PUDP es de interés para estudios mecanísticos del metabolismo de las modificaciones del ARN, la adaptación al estrés y el reconfiguramiento de vías en modelos celulares relevantes para enfermedades.
GS1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PUDP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PUDP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PUDP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PUDP alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.