GRSF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405858

概要

GRSF1は、ミトコンドリアに豊富に存在するRNA結合タンパク質GRSF-1をコードしており、Gに富むRNA配列要素を認識してミトコンドリア遺伝子発現の転写後制御を支えます。GRSF-1はミトコンドリアRNAのプロセシング、安定性、翻訳に関与し、その結果として酸化的リン酸化、ミトコンドリアリボソーム機能、ならびに細胞のバイオエネルギーに影響を及ぼします。これらの役割を通じて、GRSF-1はRNA代謝をストレス応答やミトコンドリア恒常性の維持と結び付けています。GRSF1の活性変化は、神経変性やがんに関連した代謝リモデリングなど、ミトコンドリア機能不全を伴う状況で検討されており、こうした場面ではミトコンドリアの遺伝子発現プログラムがしばしば攪乱されています。

GRSF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGRSF1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GRSF1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GRSF1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、GRSF-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、GRSF-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GRSF1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• GRSF-1の機能に不可欠なGRSF1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GRSF1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• GRSF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびGRSF-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GRSF1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  GRSF-1 HDRプラスミド（h）および GRSF-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGRSF1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGRSF1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。