Particules Lentivirales d'Activation (h) GRPR: sc-401637-LAC

Le GRPR humain code le récepteur du peptide libérateur de gastrine, un GPCR de classe A qui se lie au peptide libérateur de gastrine et se couple principalement à Gq/11 pour activer la phospholipase C, la mobilisation du Ca²⁺ intracellulaire et les voies de signalisation PKC/MAPK en aval. L’activité de GRPR régule la communication neuroendocrine, la contractilité du muscle lisse, la sécrétion, ainsi qu’un contrôle dépendant du contexte de la prolifération et de la migration cellulaires. Il s’insère dans des voies plus larges pilotées par les GPCR qui modulent des programmes transcriptionnels, la dynamique du cytosquelette et la désensibilisation des récepteurs via des mécanismes impliquant la β-arrestine. Une expression ou une signalisation dérégulée de GRPR a été associée à des altérations des circuits neuropeptidergiques et a été étudiée en oncologie et en biologie de l’inflammation comme marqueur d’un remodelage des voies de signalisation et d’une croissance médiée par les récepteurs.

Les particules d'activation lentivirales GRPR (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de GRPR dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GRPR (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription GRPR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GRPR. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif GRPR ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.