GRP 75 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400471-LAC

HSPA9 kodiert GRP75 (Mortalin), ein mitochondrienassoziiertes HSP70-Chaperon, das den Proteinimport, die Faltung und die Proteostase in der mitochondrialen Matrix sowie an Kontaktstellen zwischen Mitochondrien und ER unterstützt. GRP75 trägt zur mitochondrialen Biogenese und Qualitätskontrolle bei, verknüpft Stressantworten mit dem Energiestoffwechsel und moduliert Apoptose und Seneszenz durch Interaktionen mit Signalwegen wie der p53-Signalgebung und Netzwerken des oxidativen Stresses. Eine veränderte HSPA9/GRP75-Funktion wurde mit Phänotypen mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht und wird u. a. im Kontext von Neurodegeneration, Syndromen des hämatopoetischen Versagens und dem Stoffwechsel von Krebszellen untersucht. Als zentraler Regulator der zellulären Stressresilienz wird GRP75 häufig hinsichtlich seiner Rollen in der mitochondrialen Dynamik, dem Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies und der Signalübertragung an mitochondrienassoziierten Membranen untersucht.

GRP 75 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente HSPA9-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

GRP 75 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der HSPA9-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen GRP 75-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen HSPA9-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.