GROα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403256-ACT

CXCL1 codifica a quimiocina GROα, um ligante CXC ELR+ secretado que se liga ao CXCR2 para promover a quimiotaxia de neutrófilos, a ativação endotelial e redes de citocinas inflamatórias. A GROα participa de cascatas de sinalização da imunidade inata, incluindo as vias NF-κB e MAPK, moldando o recrutamento de leucócitos e a remodelação tecidual durante inflamação aguda e crônica. A expressão desregulada de CXCL1/GROα tem sido associada a microambientes inflamatórios e a interações estroma–imune alteradas observadas em múltiplos contextos de doença, tornando-a um nó molecular útil para dissecar a migração celular dirigida por quimiocinas e a sinalização parácrina. Modelos in vitro e in vivo frequentemente utilizam CXCL1 para estudar a percepção de gradientes, o tráfego mieloide e alterações associadas à inflamação em compartimentos epiteliais e vasculares.

GROα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CXCL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GROα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CXCL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CXCL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GROα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CXCL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GROα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GROα em células tumorais com expressão de CXCL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.