Plasmide Double Nickase (h) GRK 6: sc-402061-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GRK 6 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GRK 6 Double Nickase (h) et le plasmide GRK 6 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GRK6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GRK 6 Antibody (D-10): sc-377494
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GRK 6 | sc-402061-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GRK 6 | sc-402061-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRK6 code la kinase 6 des récepteurs couplés aux protéines G (GRK6), une kinase sérine/thréonine qui phosphoryle les GPCR activés afin de favoriser le recrutement de la β-arrestine, la désensibilisation des récepteurs et leur trafic endocytique. Par ces mécanismes, GRK6 module la durée des signaux et le biais des voies de signalisation au sein des cascades liées à l’AMPc/PKA, à MAPK/ERK et à PI3K, influençant la signalisation inflammatoire, la chimiotaxie et la réactivité des récepteurs neuronaux. GRK6 régule également des substrats non canoniques et des complexes de signalisation organisés autour de protéines échafaudages, en lien avec la dynamique du cytosquelette et les programmes de migration des cellules immunitaires. Une activité ou une expression dérégulée de GRK6 a été associée à des réponses immunitaires altérées, à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodégénératifs, ainsi qu’à des réseaux de signalisation des GPCR pertinents en cancérologie, ce qui en fait une cible d’étude importante pour la signalisation des récepteurs et les voies associées aux maladies.
GRK 6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GRK6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GRK6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GRK6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GRK6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.