Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
GRHL3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404946
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GRHL3 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico GRHL3, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GRHL3 Antibody (C-12): sc-398838
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GRHL3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-404946 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
GRHL3 (fattore di trascrizione 3 simile a grainyhead) è un regolatore trascrizionale specifico di sequenza che coordina la differenziazione epiteliale, la formazione della barriera e programmi genici attivati in risposta alle ferite. Contribuisce a mantenere l’omeostasi epidermica modulando la proliferazione dei cheratinociti e le reti di differenziazione terminale, e interagisce con vie che controllano la polarità cellulare, l’adesione e il controllo trascrizionale di geni strutturali e delle giunzioni. Un’attività di GRHL3 deregolata è stata collegata a difetti dello sviluppo e a patologie epiteliali, e studi su epiteli squamosi e stati trascrizionali associati al carcinoma riportano pattern di espressione alterati. In quanto fattore nucleare che modella l’espressione genica epiteliale, GRHL3 è spesso studiato in modelli di morfogenesi tissutale, risposte allo stress e determinazione del destino di linea.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GRHL3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GRHL3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GRHL3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GRHL3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GRHL3.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GRHL3 per lo studio della segnalazione di GRHL3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni GRHL3 critici per la funzione di GRHL3
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GRHL3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal GRHL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GRHL3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GRHL3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal GRHL3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GRHL3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GRHL3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GRHL3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.