granzyme K Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407038

Panoramica

GZMK codifica la granzima K, una serin-proteasi di tipo tripsina immagazzinata nei granuli dei linfociti citotossici e rilasciata alle sinapsi immunologiche per modulare le risposte delle cellule bersaglio e la segnalazione infiammatoria. L’attività della granzima K è collegata ai programmi effettrici citotossici, al rimodellamento proteolitico di substrati intracellulari e al crosstalk con vie apoptotiche e di risposta allo stress che influenzano il danno tissutale e la regolazione immunitaria. Nell’immunità umana, l’espressione di GZMK è caratteristica dei linfociti T CD8+ attivati e di specifici sottogruppi di cellule NK ed è spesso utilizzata come marcatore di attivazione immunitaria e di differenziazione citotossica. Un’espressione deregolata di GZMK è stata associata a microambienti infiammatori e a patologie immuno-mediate, a sostegno del suo studio in contesti di infezione, autoimmunità e immunologia dei tumori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO granzyme K (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GZMK in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GZMK insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GZMK a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina granzyme K.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GZMK per lo studio della segnalazione di granzyme K, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GZMK critici per la funzione di granzyme K
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GZMK per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal granzyme K CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal granzyme K CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GZMK. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal granzyme K Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR granzyme K (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GZMK per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GZMK definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.