GPR35 Lentiviral Activation Particles (h): sc-416792-LAC

GPR35 kodiert einen rhodopsinähnlichen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der in Immun- und gastrointestinalen Geweben als Chemosensor fungiert und vor allem an die Gi/o-Signalgebung koppelt, um cAMP, Calciumflüsse und nachgeschaltete MAPK‑Signalwege zu modulieren. Zu den beschriebenen Liganden zählen kleine Moleküle, die mit Mikrobiota und Stoffwechsel assoziiert sind, wodurch GPR35 an der Schnittstelle zwischen Umweltsensorik und Entzündungsregulation positioniert ist. In menschlichen Zellen beeinflusst die Aktivität von GPR35 die Migration von Leukozyten, Antworten der Epithelbarriere und Zytokin-Signalprogramme, die die mukosale Homöostase prägen. Eine veränderte GPR35-Expression oder -Signalgebung wurde mit Mechanismen im Zusammenhang mit chronisch-entzündlichen Darmerkrankungen sowie mit der Biologie des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in Studien zur Immunometabolik und zu GPCR‑Signalisierungsnetzwerken unterstützt.

GPR35 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente GPR35-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

GPR35 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der GPR35-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen GPR35-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen GPR35-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.