Partículas Lentivirales de Activación (h) GPR35: sc-416792-LAC

GPR35 codifica un receptor acoplado a proteína G de tipo rodopsina que funciona como quimiosensor en tejidos inmunitarios y gastrointestinales, y se acopla principalmente a la señalización Gi/o para modular el AMPc, el flujo de calcio y las vías MAPK aguas abajo. Entre los ligandos descritos se incluyen pequeñas moléculas asociadas a la microbiota y al metabolismo, lo que sitúa a GPR35 en la interfaz entre la detección del entorno y la regulación de la inflamación. En células humanas, la actividad de GPR35 influye en el tráfico de leucocitos, las respuestas de la barrera epitelial y los programas de señalización de citocinas que configuran la homeostasis mucosa. La expresión o señalización alteradas de GPR35 se han asociado con mecanismos relacionados con la enfermedad inflamatoria intestinal y con la biología del microambiente tumoral, lo que respalda su uso en estudios de inmunometabolismo y redes de señalización de GPCR.

Las partículas de activación lentiviral GPR35 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de GPR35 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral GPR35 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción GPR35, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de GPR35. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo GPR35 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.