Plásmido CRISPR de Activación (h) GPR158: sc-407138-ACT

GPR158 (receptor acoplado a proteína G 158) es un GPCR huérfano de clase C, enriquecido en el sistema nervioso y vinculado a la regulación de la excitabilidad neuronal, la señalización sináptica y las respuestas neuroendocrinas. A menudo se describe como un modulador tipo andamiaje de las vías de los GPCR que puede influir en las salidas de señalización relacionadas con cAMP/PKA y en los programas transcripcionales posteriores. La alteración de la expresión de GPR158 se ha asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y con la señalización relacionada con el estrés, y también se ha estudiado en el contexto de la biología tumoral y la regulación del crecimiento celular. Estas características convierten a GPR158 en una diana útil para investigar redes de señalización asociadas a receptores, mecanismos de plasticidad neuronal y adaptaciones transcripcionales al estrés celular.

GPR158 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPR158 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPR158 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPR158 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPR158, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPR158. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPR158 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPR158 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPR158 en células tumorales con expresión de GPR158 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.