GPR105 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405954

Visão geral

P2RY14 codifica o GPR105, um receptor acoplado à proteína G responsivo a açúcares de UDP, que detecta açúcares nucleotídicos extracelulares como a UDP-glicose e ligantes relacionados. A sinalização do GPR105 acopla-se principalmente a vias Gi para modular a dinâmica do AMPc, a quimiotaxia e programas de genes inflamatórios, conectando o estresse tecidual e a liberação de metabólitos ao comportamento das células imunes. A expressão é enriquecida em populações de leucócitos e tem sido associada à regulação de respostas imunes inatas e adaptativas, incluindo funções de macrófagos e células dendríticas. A atividade desregulada de P2RY14/GPR105 tem sido implicada em microambientes inflamatórios e em mecanismos relacionados ao sistema imune relevantes para contextos de doenças cardiometabólicas e pulmonares.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GPR105 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene P2RY14 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do P2RY14, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do P2RY14 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GPR105.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de P2RY14 para a investigação da sinalização de GPR105, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) P2RY14 críticos para a função GPR105
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos P2RY14 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GPR105 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GPR105 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus P2RY14. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GPR105 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GPR105 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia P2RY14 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo P2RY14 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.