gp91phox/CYBB/NOX2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400222-ACT

CYBB codifica a gp91phox (NOX2), a subunidade catalítica de membrana do complexo NADPH oxidase (NOX2) dos fagócitos, que transfere elétrons do NADPH para o oxigênio molecular para gerar superóxido e, a partir dele, espécies reativas de oxigênio (ROS) subsequentes. Essa explosão oxidativa sustenta a defesa imune inata, a função do fagolisossomo, a sinalização sensível ao estado redox e respostas inflamatórias reguladas em neutrófilos, macrófagos e outras linhagens mieloides. A atividade da NOX2 integra-se a vias que controlam a eliminação de microrganismos, a produção de citocinas e a formação de NETs, e também contribui para uma homeostase redox mais ampla em células imunes. A desregulação ou perda de função de CYBB está associada à geração deficiente de ROS e a fenótipos de imunodeficiência, e as ROS dependentes de NOX2 também têm sido estudadas em contextos de inflamação crônica e lesão tecidual.

gp91phox/CYBB/NOX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CYBB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

gp91phox/CYBB/NOX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CYBB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CYBB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de gp91phox/CYBB/NOX2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CYBB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de gp91phox/CYBB/NOX2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via gp91phox/CYBB/NOX2 em células tumorais com expressão de CYBB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.