GnRHR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401783-ACT

GNRHR codifica o receptor humano do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRHR), um GPCR de classe A que medeia as respostas hipofisárias ao GnRH hipotalâmico para regular a secreção do hormônio luteinizante (LH) e do hormônio folículo-estimulante (FSH). Após a ligação do ligante, o GnRHR acopla-se principalmente a Gq/11 para ativar a sinalização da fosfolipase C, promovendo a produção de IP3/DAG, a mobilização de cálcio intracelular e a ativação da cascata PKC–MAPK, que molda os programas transcricionais das células gonadotróficas. Esse eixo de sinalização integra o feedback endócrino reprodutivo e a dinâmica de estimulação pulsátil, influenciando a diferenciação celular e as vias de biossíntese hormonal. A expressão ou sinalização desregulada de GNRHR está associada a distúrbios da função do eixo reprodutivo, tornando-o um modelo útil para estudar tráfego de GPCR, dessensibilização e redes de sinalização endócrina.

GnRHR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GNRHR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GnRHR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GNRHR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GNRHR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GnRHR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GNRHR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GnRHR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GnRHR em células tumorais com expressão de GNRHR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.