GnRHR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401783-ACT

GNRHR kodiert den humanen Gonadotropin-Releasing-Hormon-Rezeptor (GnRHR), einen GPCR der Klasse A, der die hypophysären Antworten auf hypothalamisches GnRH vermittelt und so die Ausschüttung von luteinisierendem Hormon und follikelstimulierendem Hormon reguliert. Nach Ligandenbindung koppelt GnRHR vorwiegend an Gq/11 und aktiviert die Phospholipase‑C-Signalübertragung, was die Bildung von IP3/DAG, die Mobilisierung intrazellulären Calciums sowie die Aktivierung der PKC–MAPK-Kaskade auslöst, die die Transkriptionsprogramme der Gonadotropen prägt. Diese Signalachse integriert reproduktive endokrine Rückkopplung und die Dynamik pulsatiler Stimulation und beeinflusst dadurch zelluläre Differenzierung sowie Signalwege der Hormonbiosynthese. Eine fehlregulierte GNRHR-Expression oder -Signalgebung ist mit Störungen der Funktion der reproduktiven Achse assoziiert und macht GNRHR zu einem nützlichen Modell für die Untersuchung von GPCR-Trafficking, Desensibilisierung und endokrinen Signalnetzwerken.

GnRHR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GNRHR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GnRHR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GNRHR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GNRHR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GnRHR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GNRHR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GnRHR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GnRHR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GNRHR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.