GM2/GD2 synthase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420474

Panoramica

B4galnt1 codifica la sintetasi di GM2/GD2, una glicosiltransferasi localizzata nel Golgi che trasferisce N-acetilgalattosammina ai precursori dei gangliosidi per generare GM2 e GD2, modellando la composizione dei glicosfingolipidi nelle membrane cellulari. Controllando l’abbondanza dei gangliosidi, influenza l’organizzazione dei lipid raft, le interazioni cellula-cellula e i processi di segnalazione importanti per lo sviluppo neuronale e la funzione sinaptica. Nei tessuti murini, l’attività di B4galnt1 contribuisce ai pattern di glicolipidi associati alla mielina e all’omeostasi neuro-immune attraverso la regolazione di eventi di riconoscimento mediati dai glicolipidi. La disregolazione della biosintesi dei gangliosidi è associata a fenotipi neurologici e a paesaggi antigenici di superficie cellulare alterati, rendendo B4galnt1 un bersaglio chiave per studi meccanicistici in neurobiologia e biologia delle membrane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GM2/GD2 synthase (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene B4galnt1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del B4galnt1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto B4galnt1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GM2/GD2 synthase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di B4galnt1 per lo studio della segnalazione di GM2/GD2 synthase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni B4galnt1 critici per la funzione di GM2/GD2 synthase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di B4galnt1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GM2/GD2 synthase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus B4galnt1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GM2/GD2 synthase Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GM2/GD2 synthase (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia B4galnt1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio B4galnt1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.