Plásmido CRISPR de Activación (h) Glutathione Peroxidase 2/GPX2: sc-406827-ACT

La GPX2 humana (glutatión peroxidasa 2) es una enzima antioxidante dependiente de selenio que reduce el peróxido de hidrógeno y los hidroperóxidos lipídicos utilizando glutatión, lo que ayuda a mantener la homeostasis redox en las barreras epiteliales. Al limitar el daño oxidativo, la GPX2 influye en la señalización sensible a las ROS, incluidas las respuestas al estrés impulsadas por NRF2, las vías inflamatorias y las decisiones celulares relacionadas con la proliferación y la apoptosis. La actividad de la GPX2 está estrechamente vinculada al metabolismo del glutatión y a procesos más amplios de desintoxicación que configuran la función mitocondrial y la integridad de los lípidos de membrana. La expresión desregulada de GPX2 se ha asociado con fenotipos de estrés oxidativo y patologías vinculadas a la inflamación, y se estudia con frecuencia en contextos como la biología gastrointestinal, la diferenciación epitelial y la adaptación redox asociada a tumores.

Glutathione Peroxidase 2/GPX2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPX2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Glutathione Peroxidase 2/GPX2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPX2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPX2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Glutathione Peroxidase 2/GPX2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPX2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Glutathione Peroxidase 2/GPX2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Glutathione Peroxidase 2/GPX2 en células tumorales con expresión de GPX2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.