Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glutathione Peroxidase 1/GPX1: sc-400631-ACT

GPX1 code la glutathion peroxydase 1, une sélénoprotéine cytosolique qui réduit le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes organiques en utilisant le glutathion, limitant ainsi les dommages oxydatifs aux protéines, aux lipides et à l’ADN. En contrôlant l’état redox intracellulaire, GPX1 influence la signalisation par les espèces réactives de l’oxygène, le métabolisme du glutathion et des voies sensibles au stress qui modulent la fonction mitochondriale, l’apoptose et la signalisation inflammatoire. Des altérations de l’expression ou de l’activité de GPX1 ont été associées à des phénotypes de stress oxydatif observés dans la biologie des cancers, la neurodégénérescence, les dysfonctions métaboliques et la recherche cardiovasculaire. En tant qu’enzyme antioxydante largement exprimée, GPX1 constitue un nœud utile pour analyser comment l’homéostasie redox module les décisions de destinée cellulaire et les réponses adaptatives au stress.

Glutathione Peroxidase 1/GPX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glutathione Peroxidase 1/GPX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glutathione Peroxidase 1/GPX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glutathione Peroxidase 1/GPX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glutathione Peroxidase 1/GPX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.