GluR-5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402475-ACT

GRIK1 codifica a subunidade GluR-5 (GluK1) do receptor ionotrópico de glutamato do tipo cainato, um canal catiônico ativado por ligante que contribui para a neurotransmissão excitatória rápida no sistema nervoso central. Receptores contendo GluR-5 modulam a força sináptica e a excitabilidade neuronal por meio do fluxo de sódio e cálcio, moldando a atividade e a plasticidade das redes em vias envolvidas na aprendizagem, no processamento sensorial e na sinalização da dor. A atividade do receptor interage com cascatas de sinalização dependentes de cálcio e programas de transcrição regulados pela atividade, que influenciam o desenvolvimento e o remodelamento das sinapses. A desregulação da sinalização por receptores de cainato e da expressão de GRIK1 tem sido associada a fenótipos neuropsiquiátricos e neurológicos, sustentando seu uso como alvo mecanístico para estudar o equilíbrio excitação/inibição e a disfunção de circuitos.

GluR-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GRIK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GluR-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GRIK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GRIK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GluR-5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GRIK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GluR-5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GluR-5 em células tumorais com expressão de GRIK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.