Plásmido CRISPR de Activación (h) Glucose Transporter Glut3: sc-400584-ACT

SLC2A3 codifica el transportador de glucosa Glut3 (GLUT3), un transportador facilitador de glucosa de alta afinidad que permite una rápida captación de glucosa en células con una elevada demanda energética. Al regular la disponibilidad intracelular de glucosa, GLUT3 influye en el flujo glucolítico, la producción de ATP y las vías de señalización metabólica posteriores que coordinan la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. La alteración de la expresión de SLC2A3 se ha asociado con la reprogramación metabólica y con programas adaptativos a la hipoxia, y se estudia con frecuencia en contextos como la inflamación, la neurobiología y el metabolismo asociado a tumores. Como transportador de membrana plasmática, GLUT3 también proporciona una lectura funcional medible mediante cambios en la captación de glucosa y la producción de lactato.

Glucose Transporter Glut3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC2A3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Glucose Transporter Glut3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC2A3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC2A3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Glucose Transporter Glut3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC2A3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Glucose Transporter Glut3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Glucose Transporter Glut3 en células tumorales con expresión de SLC2A3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.