Plasmide Double Nickase (h) Glucose Transporter Glut2: sc-400347-NIC

SLC2A2 code pour le transporteur de glucose GLUT2, un transporteur d’hexoses à diffusion facilitée qui assure un flux bidirectionnel de glucose à travers la membrane plasmique dans des tissus métaboliquement actifs, soutenant la détection du glucose et le contrôle homéostatique du métabolisme des glucides. GLUT2 influence l’équilibre énergétique cellulaire en modulant la disponibilité des substrats pour la glycolyse et la signalisation métabolique en aval, et il contribue à des programmes transcriptionnels sensibles aux nutriments dans des contextes endocriniens et épithéliaux. Des altérations de l’expression ou de la fonction de SLC2A2 ont été associées à une dérégulation de la gestion du glucose et à des phénotypes pertinents pour le diabète et d’autres troubles métaboliques apparentés, ainsi qu’à des effets dépendants du transporteur sur la physiologie du transport épithélial. Dans des modèles cellulaires humains, la perturbation de SLC2A2 est couramment utilisée pour analyser la cinétique d’absorption du glucose, les flux métaboliques et les voies de détection des nutriments.

Glucose Transporter Glut2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SLC2A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SLC2A2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SLC2A2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SLC2A2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.