GILZ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401424-ACT

TSC22D3 codifica a proteína “glucocorticoid-induced leucine zipper” (GILZ), um regulador responsivo ao stress e a hormonas que liga a sinalização do recetor de glicocorticoides ao controlo transcricional de programas imunitários e inflamatórios. A GILZ modula vias incluindo NF-κB e AP-1, moldando a expressão de citocinas, a ativação de células T e a polarização de macrófagos, e pode influenciar a sobrevivência e a diferenciação celular através de interações com nós de sinalização relacionados com MAPK e PI3K/AKT. Alterações na expressão de TSC22D3/GILZ têm sido associadas a estados inflamatórios desregulados e a patologia mediada pelo sistema imunitário, sendo frequentemente estudada em contextos em que a responsividade a glicocorticoides, a tolerância ou mecanismos de imunossupressão são relevantes. Estas propriedades tornam a GILZ uma ferramenta molecular útil para dissecar redes transcricionais que governam a inflamação, a adaptação ao stress e funções imunitárias específicas de linhagem em células humanas.

GILZ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TSC22D3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GILZ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TSC22D3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TSC22D3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GILZ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TSC22D3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GILZ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GILZ em células tumorais com expressão de TSC22D3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.