Ggta1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420545

概要

Ggta1は、α1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ1をコードしており、ゴルジ体に局在する糖転移酵素として、ガラクトースを転移して糖タンパク質および糖脂質上にGalα1-3Galエピトープを形成します。末端糖鎖構造を規定することで、Ggta1はタンパク質の成熟、膜糖鎖修飾、ならびに免疫認識や炎症シグナル伝達に影響し得る細胞—細胞／細胞—マトリックス相互作用に関与します。マウスにおいてGgta1活性は、異種抗原（xenoantigen）生物学や補体・抗体媒介性応答の研究に関連し、免疫における糖鎖修飾依存的機構のモデルとして用いられます。そのため、本酵素を破壊することは、糖鎖エピトープが受容体結合、組織適合性、ならびに下流の免疫経路をどのように制御するかを解析するうえで有用です。

Ggta1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるGgta1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ggta1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ggta1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ggta1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ggta1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ggta1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ggta1の機能に不可欠なGgta1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ggta1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ggta1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびGgta1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ggta1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ggta1 HDRプラスミド（m）および Ggta1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGgta1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGgta1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。