Plásmido CRISPR de Activación (h) G_γ13: sc-403045-ACT

GNG13 codifica la subunidad gamma Gγ13 de la proteína G humana, un componente de los complejos de proteínas G heterotriméricas que acoplan los GPCR activados a vías efectoras aguas abajo. Como parte del dímero Gβγ, Gγ13 ayuda a regular la propagación de la señal hacia dianas como la fosfolipasa Cβ y los canales iónicos, modulando salidas de segundos mensajeros, incluidos el flujo de calcio y las respuestas MAPK/ERK. La expresión de GNG13 está enriquecida en contextos asociados a lo sensorial, lo que respalda funciones en la señalización quimiosensorial y neuronal donde se requiere un acoplamiento preciso a GPCR. La expresión desregulada de subunidades de proteínas G o la remodelación de vías de GPCR se observa con frecuencia en el cáncer y en estados relevantes para la neurobiología, lo que hace que GNG13 sea útil para estudios mecanísticos de la plasticidad de la señalización y el control del estado celular.

Gγ13 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GNG13 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Gγ13 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GNG13 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GNG13, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Gγ13. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GNG13 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Gγ13 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Gγ13 en células tumorales con expresión de GNG13 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.