GDF-15 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423881-ACT

Der Wachstumsdifferenzierungsfaktor 15 (Gdf15) codiert für GDF-15, ein stressreaktives Zytokin aus der TGF-β-Superfamilie, das durch Zellschädigung, Entzündung, mitochondriale Dysfunktion und metabolisches Ungleichgewicht induziert wird. In Mausgeweben moduliert GDF-15 Transkriptionsprogramme, die mit integrierten Stressantworten, Immunregulation und Energiehomöostase verknüpft sind, und beeinflusst dabei Prozesse wie die Aktivierung von Makrophagen und die systemische metabolische Anpassung. Eine veränderte Gdf15-Expression wurde mit kardiometabolischen Phänotypen, entzündlichen Zuständen und krebsbezogener Biologie in Verbindung gebracht, wobei sie Gewebestress und Remodeling widerspiegeln kann. Diese Eigenschaften machen GDF-15 zu einem nützlichen Ansatzpunkt, um Zytokinsignalgebung, Stressanpassungswege und die Wechselwirkungen zwischen Immun- und Stoffwechselkompartimenten zu untersuchen.

GDF-15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Gdf15-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GDF-15 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Gdf15-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Gdf15-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GDF-15-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Gdf15-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GDF-15-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GDF-15-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Gdf15-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.