GD3 Synthase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404015-ACT

ST8SIA1 codifica a sintase de GD3, uma sialiltransferase residente no complexo de Golgi que catalisa a conversão de GM3 no disialogangliosídeo GD3, moldando a composição de glicosfingolípidos na membrana plasmática. Ao modular microdomínios de membrana dependentes de gangliosídeos, a sintase de GD3 influencia a sinalização de recetores, as interações célula–célula e processos de tráfego vesicular que se integram com vias que controlam a proliferação, a migração e as respostas ao stress. Alterações na atividade de ST8SIA1 têm sido associadas a mudanças nos padrões de glicosilação observadas na biologia do cancro e na neurobiologia, em que o equilíbrio de gangliosídeos pode afetar programas de diferenciação e o reconhecimento imunitário. Estas propriedades tornam o ST8SIA1 um alvo útil para dissecar a regulação, impulsionada pela sialilação, de redes de sinalização e da organização da membrana.

GD3 Synthase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ST8SIA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GD3 Synthase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ST8SIA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ST8SIA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GD3 Synthase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ST8SIA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GD3 Synthase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GD3 Synthase em células tumorais com expressão de ST8SIA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.