Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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GCM2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430769
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GCM2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico GCM2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GCM2 Antibody (C-5): sc-390603
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GCM2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-430769 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Gcm2 codifica per il fattore di trascrizione GCM2, un membro della famiglia “glial cells missing”, che si lega al DNA per regolare programmi di espressione genica specifici di linea cellulare. Durante lo sviluppo del topo, GCM2 è fondamentale per la specificazione e il mantenimento delle ghiandole paratiroidi, coordinando reti trascrizionali che sostengono l’omeostasi di calcio e fosfato attraverso la regolazione di vie associate all’ormone paratiroideo. L’alterazione di Gcm2 compromette la differenziazione e l’identità dei tessuti endocrini, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale dell’organogenesi. Una funzione di GCM2 alterata è collegata a difetti dello sviluppo paratiroideo e a fenotipi di disregolazione del metabolismo minerale, a supporto della sua rilevanza in modelli dei meccanismi di malattie endocrine e metaboliche.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GCM2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gcm2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gcm2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gcm2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GCM2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gcm2 per lo studio della segnalazione di GCM2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Gcm2 critici per la funzione di GCM2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gcm2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal GCM2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GCM2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gcm2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal GCM2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GCM2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gcm2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gcm2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.