GCM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403269-ACT

O GCM1 humano (glial cells missing homolog 1) é um fator de transcrição com expressão restrita a determinadas linhagens, que desempenha um papel central na diferenciação do trofoblasto e no desenvolvimento placentário, incluindo a formação do sinciciotrofoblasto e a regulação de genes envolvidos na produção hormonal, na fusão celular e na troca de nutrientes. Ao se ligar a elementos específicos de promotores/realçadores (enhancers), o GCM1 integra sinais do desenvolvimento a programas transcricionais que controlam o comprometimento do destino celular, a invasão e o remodelamento vascular na interface materno-fetal. Alterações na expressão ou na atividade do GCM1 têm sido associadas a fenótipos de disfunção placentária e a desfechos adversos na biologia da gestação, tornando-o relevante para o estudo de vias subjacentes ao comprometimento da maturação do trofoblasto e à insuficiência placentária. Sua rede a jusante se cruza com circuitos transcricionais responsivos a estresse, hipóxia e fatores de crescimento, que podem ser modelados em células-tronco de trofoblasto, organoides placentários e contextos epiteliais relacionados.

GCM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GCM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GCM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GCM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GCM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GCM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GCM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GCM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GCM1 em células tumorais com expressão de GCM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.