GAP-43 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420484

Panoramica

Gap43 codifica la proteina associata alla crescita 43 (GAP-43), una fosfoproteina associata alla membrana e arricchita nei neuroni, che si localizza nei coni di crescita e nei terminali presinaptici, dove regola l’estensione dei neuriti, la guida assonale e il rimodellamento sinaptico. La funzione di GAP-43 è strettamente legata alla dinamica del citoscheletro di actina e alla segnalazione calcio-dipendente, inclusa la fosforilazione mediata da PKC, che modula le interazioni con la membrana e i processi associati alla plasticità. Nel topo, l’espressione di Gap43 aumenta durante lo sviluppo e dopo lesioni neurali, rendendolo un marcatore molecolare ampiamente utilizzato della crescita assonale e delle risposte rigenerative. Un rimodellamento dei circuiti dipendente da GAP-43 non correttamente regolato è stato associato ad alterazioni della connettività sinaptica in modelli di disturbi del neurosviluppo e di patologie neurodegenerative, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici sul funzionamento delle reti neuronali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GAP-43 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gap43 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gap43 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gap43 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GAP-43.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gap43 per lo studio della segnalazione di GAP-43, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gap43 critici per la funzione di GAP-43
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gap43 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GAP-43 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal GAP-43 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gap43. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GAP-43 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR GAP-43 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gap43 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gap43 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.