gametogenetin CRISPR Activation Plasmid (m): sc-434015-ACT

Das Mausgen **Ggn** kodiert Gametogenetin, ein in Keimzellen angereichertes Protein, das mit der Spermatogenese und testisspezifischen Differenzierungsprogrammen in Verbindung gebracht wird. Expressionsmuster deuten auf eine Beteiligung an der postmeiotischen Reifung männlicher Keimzellen hin, mit möglichen Rollen bei der Umgestaltung des Zytoskeletts und bei Protein-Transportprozessen, die die Spermienentwicklung unterstützen. Eine veränderte Regulation keimbahn-exprimierter Faktoren wie **Ggn** wird häufig genutzt, um Signalwege zu untersuchen, die Fruchtbarkeit, das Überleben von Keimzellen und die Kontrolle entwicklungsrelevanter Gene steuern. In biomedizinischen Forschungskontexten dient **Ggn** als nützlicher Marker und funktioneller Knotenpunkt zur Analyse transkriptioneller Netzwerke, die in der männlichen Keimbahn aktiv sind.

gametogenetin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ggn-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

gametogenetin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ggn-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ggn-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen gametogenetin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ggn-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von gametogenetin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des gametogenetin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ggn-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.