Plásmido CRISPR de Activación (m) gametogenetin: sc-434015-ACT

El gen **Ggn** de ratón codifica la **gametogenetina**, una proteína enriquecida en células germinales implicada en la espermatogénesis y en programas de diferenciación específicos del testículo. Los patrones de expresión sugieren su participación en la maduración de las células germinales posmeióticas, con posibles funciones en la remodelación del citoesqueleto y en procesos de tráfico de proteínas que favorecen el desarrollo del espermatozoide. La regulación alterada de factores expresados en la línea germinal, como **Ggn**, se utiliza con frecuencia para estudiar las vías que gobiernan la fertilidad, la supervivencia de las células germinales y el control de genes del desarrollo. En contextos de investigación biomédica, **Ggn** sirve como un marcador útil y como un nodo funcional para diseccionar redes transcripcionales activas en el linaje reproductivo masculino.

gametogenetin El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ggn sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

gametogenetin El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ggn en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ggn, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de gametogenetin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ggn y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de gametogenetin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía gametogenetin en células tumorales con expresión de Ggn silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.