GABA T-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403545

Visão geral

SLC6A11 codifica o transportador de GABA 3 (GABA T-3), um transportador de solutos dependente de Na⁺/Cl⁻ que medeia a recaptação de alta afinidade do ácido γ-aminobutírico a partir do espaço extracelular, regulando a neurotransmissão inibitória. Ao controlar a disponibilidade de GABA sináptico e extrasináptico, o GABA T-3 influencia a excitabilidade neuronal, a inibição tônica e a homeostase geral dos circuitos GABAérgicos. Esse transportador participa de processos de transporte de neurotransmissores e de transporte de membrana acoplado a íons, que se conectam ao equilíbrio metabólico glutamato–GABA e à atividade oscilatória em nível de rede. A depuração desregulada de GABA e a expressão alterada de SLC6A11 têm sido estudadas no contexto de fenótipos neuropsiquiátricos e neurológicos em que o equilíbrio da sinalização inibitória está comprometido, sustentando investigações mecanísticas da disfunção GABAérgica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GABA T-3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SLC6A11 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SLC6A11, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SLC6A11 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GABA T-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SLC6A11 para a investigação da sinalização de GABA T-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SLC6A11 críticos para a função GABA T-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SLC6A11 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GABA T-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GABA T-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SLC6A11. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GABA T-3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GABA T-3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SLC6A11 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SLC6A11 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.