Plásmido Doble Nickase (h) G9a: sc-402484-NIC

EHMT2 codifica la metiltransferasa de lisina G9a, uno de los principales “writers” de H3K9me1/2 que establece cromatina represiva y favorece el silenciamiento génico estable a lo largo del desarrollo y la especificación de linajes. G9a actúa en complejos epigenéticos nucleares para coordinar la organización de la cromatina, los programas transcripcionales, las respuestas al daño del ADN y la comunicación cruzada con otras vías de metilación de histonas y del ADN. La actividad alterada de EHMT2/G9a se ha vinculado a la desregulación transcripcional generalizada observada en biología del cáncer, fenotipos del neurodesarrollo y señalización inflamatoria, lo que la convierte en un nodo común en estudios de plasticidad epigenética. Investigar la metilación de H3K9 dependiente de G9a ayuda a definir cómo el estado de la cromatina influye en la proliferación, la diferenciación y las redes transcripcionales adaptativas al estrés en células humanas.

G9a El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EHMT2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EHMT2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EHMT2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EHMT2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.