Plásmido CRISPR de Activación (h) G1P3: sc-403682-ACT

El IFI6 (G1P3) humano codifica una proteína asociada a membrana e inducida por interferón, que modula la señalización inmunitaria innata y las respuestas celulares al estrés. IFI6 se induce aguas abajo de la señalización de interferón de tipo I/JAK–STAT y se ha relacionado con la regulación de la integridad mitocondrial, la sensibilidad a la apoptosis y programas de restricción antiviral que remodelan redes transcripcionales. Se han descrito alteraciones en la expresión de IFI6 en contextos inflamatorios y en múltiples cánceres, donde se correlaciona con la activación de la vía del interferón y con cambios en la supervivencia y la proliferación celular. En consecuencia, IFI6 constituye un nodo útil para investigar vías impulsadas por interferón, interacciones hospedador–patógeno y fenotipos de adaptación al estrés en células humanas.

G1P3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IFI6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

G1P3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IFI6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IFI6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de G1P3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IFI6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de G1P3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía G1P3 en células tumorales con expresión de IFI6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.