Partículas Lentivirales de Activación (h) FXR/NR1H4: sc-417410-LAC

NR1H4 codifica el receptor X farnesoide (FXR), un receptor nuclear activado por ligando que actúa como regulador transcripcional de la homeostasis de los ácidos biliares, el colesterol y los lípidos. FXR integra señales procedentes de los ácidos biliares para controlar redes génicas que gobiernan la síntesis y el transporte de ácidos biliares, incluida la regulación por retroalimentación de las vías metabólicas hepáticas y la circulación enterohepática. Mediante el crosstalk con programas de señalización de receptores nucleares y de inflamación, FXR influye en la fisiología de los hepatocitos y enterocitos, la función de barrera y la adaptación metabólica. La desregulación de la actividad de NR1H4/FXR se ha asociado con fenotipos hepáticos colestásicos y metabólicos y se estudia con frecuencia en el contexto de la esteatosis, la enfermedad del hígado graso no alcohólico y la disfunción del eje intestino–hígado.

Las partículas de activación lentiviral FXR/NR1H4 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de NR1H4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral FXR/NR1H4 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción NR1H4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de FXR/NR1H4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo NR1H4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.